Проточна цитофлуориметрия – суть та застосування

Проточна цитофлуориметрия – це цитологічний метод досліджень, що застосовується для поглибленого аналізу клітин. Його перевагою є те, що він дозволяє вивчити кожну клітину окремо. Даний вид аналізу допомагає зробити оцінку декількох параметрів у сотень клітин за лічені секунди. Завдяки цьому цитофлуориметрия вважається одним з найбільш швидких і точних методів аналізу, які доступні вченим і клініцистам в даний час.

Принцип

Принцип методу проточної цитофлуориметрии заснований на вимірюванні розсіювання світла і світіння (флуоресценції) клітин. Клітинну суспензію пропускають у вигляді потоку з великою швидкістю через клітинку цитометра, де відбувається її опромінення лазером. Там же проводиться, так звана гідродинамічна фокусування. Її механізм полягає в тому, що потік з комірки з досліджуваними частками на виході вливається в зовнішню струмінь, яка володіє більшою швидкістю. В результаті відбувається вибудовування частинок в упорядковану ланцюжок.

Дивіться також:  Імунорегуляторний індекс: норма і відхилення

Попередньо клітини мітять спеціальними флуоресціюючими барвниками (флуорохромами). Завдяки їм лазерний промінь збуджує вторинне світіння. Отримані світлові сигнали реєструються детекторами. У подальшому інформація обробляється за допомогою програмних алгоритмів, які дозволяють підрахувати окремі популяції клітин, що розрізняються за якими-небудь критеріями.

Дослідження з допомогою традиційної мікроскопії часто не дозволяє відрізнити різні клітини, так як вони виглядають однаково. Цитофлуориметрия може надати і інші дані (цілісність структури ДНК), провести аналіз експресії білків, виживаності клітин.

Так як для порушення флурохромів потрібні світлові промені з різною довжиною хвилі, а також різні типи детекторів, то сучасні установки оснащені декількома каналами детекції (від 4 до 30). Кількість лазерних випромінювачів може бути від 1 до 7. Більш складні за складом пристрої дозволяють здійснювати багатопараметричні дослідження відразу декількох властивостей частинок.