Синтез

Отримання рекомбінантних інтерферонів відбувається поетапно:

• виділення інформаційної РНК після активації вироблення інтерферону в бактеріальної культури;
• синтез комплементарної ДНК на основі РНК;
• вбудовування отриманої на попередньому етапі ДНК у плазмідні вектори – позахромосомні молекули ДНК, здатні до незалежного копіювання всередині бактеріальних клітин і відповідають за вироблення білків;
• отримання рекомбінантної ДНК;
• синтез клонів мікроорганізмів, що виробляють інтерферон;
• розмноження бактеріальної культури на живильному середовищі;
• виділення клітин бактерій за допомогою центрифугування;
• осадження білків-інтерферонів з розчину;
• очищення рекомбінантного інтерферону за методом афінної хроматографії або іншими способами.

Розмноження клоновій культури відбувається в промислових умовах в реакторах, а попередні етапи – в лабораторіях. Рекомбінантні ІФН продукуються поза організму людини, їх генетичний матеріал вбудований ген людського інтерферону.

Існує кілька бактеріальних культур, на основі яких отримують дані білки. Нижче вказано, з чого роблять рекомбінантний альфа 2b інтерферон:

• кишкова паличка Escherichia coli (накопичення продукту відбувається внутрішньоклітинно);
• сінна паличка Bacillussubtilis (виділяють інтерферони в навколишнє середовище);
• синегнойнаяпалочка Pseudomonas aeruginosa;
• дріжджові грибки Saccharomycopsis fibuligera.

Останній вид продуцентів відрізняється наступними перевагами в порівнянні з іншими:

• можливість використання дешевих поживних середовищ;
• легке відділення при сепарації;
• висока продуктивність процесу (більш, ніж у 10 разів порівняно з іншими);
• процес приєднання вуглеводних груп, близький за механізмом до такого у тварин клітинах.