Методика проведення

Розрізняють 2 основних види рідинної афінної хроматографії:

• Колоночная, при якій колону заповнюють нерухомою фазою і через неї пропускають суміш з потоком елюентів. Поділ може відбуватися під тиском або під внаслідок дії сили тяжіння.
• Тонкошарова. Елюенти рухається по плоскому шарі адсорбенту під впливом капілярних сил. Адсорбент наносять на пластину зі скла, керамічний або кварцову паличку, металеву фольгу.

Основні етапи робіт включають в себе:

• підготовка адсорбенту, фіксація ліганду на носії;
• подача суміші для поділу в хроматографічну колону;
• завантаження рухомої фази, зв’язування компонента лігандом;
• заміна фази для виділення пов’язаного речовини.

Призначення

Аффинная хроматографія використовується для виділення наступних видів речовин (у дужках зазначений вид застосовуваного при цьому ліганду):

• аналоги інгібіторів ферментативних, субстратів і кофакторів (ферменти);
• біоорганічні речовини, що володіють ознаками генетичної чужорідності, віруси і клітини (антитіла);
• високомолекулярні вуглеводи, полімери моносахаридів, глікопротеїни (лектини);
• ядерні білки, нуклеотидилтрансферазы (нуклеїнові кислоти);
• рецептори, транспортні білки (вітаміни, гормони);
• білки, що взаємодіють із клітинними мембранами (клітини).

Ця технологія також використовується для одержання іммобілізованих ферментів, а прив’язка їх до целюлозі дозволяє виготовити імуносорбенти.