Хроматографія ДНК-зв’язуючих білків

Виділення ДНК-зв’язуючих білків здійснюється за допомогою гепарину. Цей глікозаміноглікан здатний зв’язувати великий діапазон молекул. Аффинная хроматографія білків цієї групи використовується для виділення таких речовин, як:

• фактори ініціації і елонгації трансляції (синтез молекул нуклеїнових кислот і білків);
• рестриктази (ферменти, які впізнають певні послідовності в дволанцюжкової ДНК);
• ДНК-лігази і полімерази (ферменти, що каталізують з’єднання двох молекул з утворенням нового хімічного зв’язку і беруть участь у реплікації ДНК);
• інгібітори серинових протеаз, які відіграють важливу роль в імунних і запальних процесах;
• фактори зростання: фібробластів, Шванна, ендотеліальний;
• білки міжклітинного матриксу;
• рецептори гормонів;
• ліпопротеїди.

Переваги

Даний метод є одним з найбільш специфічних для виділення реакційноздатних сполук (ферментів і більш великих агрегатів – вірусів). Проте він використовується не тільки для виділення біологічно активних речовин.

Виявлення антитіл в малих кількостях, кількісна оцінка полиадениловой кислоти, експрес-визначення молекулярних мас дегідрогеназ, видалення певних забруднювачів, вивчення кінетики активації неактивної форми трипсину, молекулярної будови інтерферонів людини – ось далеко не весь перелік досліджень, при яких застосовується аффинная хроматографія. Застосування в клініці обумовлено такими її перевагами, як:

• Можливість ефективного очищення білків, полісахаридів, нуклеїнових кислот. Вони дещо відрізняються за своїми фізико-хімічними властивостями і втрачають свою активність при гідролізі, денатурації та інших видах впливу, що використовуються в інших методах.
• Швидкість розділення речовин, динамічний характер процесу.
• Відсутність необхідності в спеціальному очищенню ферментів і гомогенізації ізоферментів для визначення констант дисоціації.
• Можливість поділу широкого кола речовин.
• Невеликий витрата лігандів.
• Можливість поділу речовин у великих обсягах.
• Оборотний процес зв’язування біологічних макромолекул.

Дану методику можна поєднувати з іншими, накладати додаткове поле (гравітаційне, електромагнітне). Це дозволяє розширити технічні можливості хроматографії.